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Diagnosis of Leishmania by PCR

DIAGNOSI DI LEISHMANIA MEDIANTE TECNICA PCR

Per la diagnosi di Leishmania oltre ai convenzionali esami microscopici, culturali e sierologici, sono stati sviluppati numerosi test basati sul DNA mediante l’utilizzo della tecnologia PCR. La sensibilità di questi metodi è variabile, in base alla scelta della sequenza genica bersaglio ed alla matrice biologica utilizzata.
Nel nostro laboratorio abbiamo messo a punto due differenti protocolli, ottimizzati per avere in entrambi i casi un’elevata sensibilità, ed utilizzabili alternativamente a seconda degli obbiettivi diagnostici.

1. Leishmania HS (alta sensibilità) : consiste in una Nested-PCR che grazie a una duplice reazione di amplificazione del DNA consente una sensibilità molto elevata e rappresenta ad oggi la tecnica di elezione per il riscontro del parassita nei vari materiali qui sottoelencati; l’utilità di tale metodica si evidenzia nei casi in cui la sintomatologia è riferibile a Leishmaniosi ma test immunologici o di PCR tradizionale sono risultati negativi. E’ una tecnica puramente qualitativa e non permette di quantificare il carico parassitario.
2. Leishmania spp : Based on Real-Time PCR technology allows the quantification of the target gene sequence (the DNA of the kinetoplast of amastigotes). The technique consists in the amplification of DNA sample, quantified by comparison of parasitic DNA diluted to known concentrations allowing to detect the parasite load, the sensitivity is equal to 0.0125 parasites / ml of blood. The use of this method is suitable both for the diagnosis, and (especially) to monitor therapeutic efficacy.

Here are the materials suitable for the detection of Leishmania by PCR:


lymph nodes or high sensitivity and specificity Easy running or

Bone Marrow
or high sensitivity and specificity
or more complex
Drawing Blood (Buffy Coat)
or specific but less sensitive
Spleen
sensitivity or about 86% in symptomatic
conjunctiva (membrane Millipore)
sensitivity or about 90%, specificity of 100%, positive 45 days. more
Cute


We want to stress or injury so that the levy through millipore membrane oculocongiuntivale - that we perform for years as a method of investigation for diseases of the eye - has been extremely valid in the early diagnosis of leishmaniasis.
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